杭州市第六人民醫(yī)院

施軍平 過建春

 

摘  要：目的：觀察當飛利肝寧膠囊對實驗性大鼠肝纖維化的影響。方法：利用40%四氯化碳花生油給予大鼠肝皮下注射誘導肝纖維化。用當飛利肝寧膠囊進行干預，并以復方鱉甲軟肝片作陽性對照，分別在三周末及六周末取血，測量肝功能、肝纖維化相關指標，并取肝臟通過光鏡觀察肝組織病理變化。結果：當飛利肝寧膠囊組和復方鱉甲軟肝片組大鼠在三周、六周肝功能均有明顯改善，但當飛利肝寧組較復方鱉甲軟肝片更為明顯（P<0.05）；血清HA、PC-III、LN值明顯低于模型組，有顯著性差異（P<0.05）；兩組肝纖維化程度均好于模型組（P<0.05，P<0.01）。提示：當飛利肝寧膠囊和復方鱉甲軟肝片有良好的抗肝纖維化效果，其中當飛利肝寧膠囊有顯著改善肝功能、降低肝纖維化相關指標的作用。

主題詞：肝硬化/中醫(yī)藥療法  復方（中藥）/治療應用  大鼠

 

    當飛利肝寧膠囊的主要成分為當藥和水飛薊，具有清熱解毒，利膽化濕作用。近年來，國內陸續(xù)有應用該藥治療各種急、慢性肝病的報道，但對其抗肝纖維化作用及其機制進行研究不多。為此，我們進行當飛利肝寧膠囊對實驗性大鼠肝纖維化影響的研究，并與復方鱉甲軟肝片作比較�，F(xiàn)報道如下：

1  實驗材料與方法

1.1 藥物  當飛利肝寧膠囊原粉，由四川美大康藥業(yè)股份有限公司生產，批號：030215，每膠囊含生藥為1.0g；復方鱉甲軟肝片，由中國人民解放軍三0二醫(yī)院研制，內蒙古集寧制藥廠生產，批號：20030409，實驗時均以蒸餾水配制至所需濃度。

1.2 動物和試劑  Wistar大鼠48只，體重180~210g，雌雄各半，由浙江中醫(yī)學院動物實驗中心提供。丙氨酸氨基轉換酶（ALT），天門冬氨酸氨基轉換酶（AST），總蛋白（TP），白蛋白（ALB），均由英國Randox公司提供；III型前膠原（PCIII）放層粘蛋白（LN）、透明質酸（HA）放射免疫分析測定盒，均由上海海軍醫(yī)學研究所生物技術中心提供；CCL4（分析純），蘇州市第二化工廠研究所。

1.3 方法

1.3.1  分組、用藥及模型復制方法：48只大鼠隨機分為4組，分別為當飛利肝寧膠囊組，復方鱉甲軟肝片組，模型組和正常組，每組12只。參照沈志云等^[1]方法對前三組進行模型復制；第一天皮下注射40%CCL4花生油0.5ml/100g，以后每次0.3ml/100g，每周兩次，各組在造模同時灌胃給藥，每日一次。當飛利肝寧膠囊組：給當飛利肝寧膠囊每日1.5ml/100g，復方鱉甲軟肝片組：給復方鱉甲軟肝片每日1.5ml/100g(兩組藥量均相當于成人每日每公斤藥量的10倍)，模型組與正常組每日按1.5ml/100g灌以蒸餾水，整個實驗持續(xù)43天，各組分別在3周結束，6周結束時隨機處死6只大鼠，分別取血及肝組織。

1.3.2  檢測方法：大鼠摘眼球法取血，分離血清，ALT、AST、TP、ALB采用全自動生化分析儀檢測。采用放免法檢測血清透明質酸（HA），層粘連蛋白（LN），III型前膠原（PC-III）的含量。

1.3.3  肝臟組織病理學切片每次在肝左葉相同部位上取相同大小肝細胞固定于10%甲醛石蠟包埋切片，行HE及Masson’s染色，光鏡觀察。肝臟纖維化的分期（S），肝臟炎癥程度的分級（G）均參照“1995年北京病毒性肝防治方案”中病理標準^[2]，由同一病理科醫(yī)師在相同環(huán)境中進行。

1.4 統(tǒng)計方法采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件進行分析。

 

2  結果

2.1  大鼠一般情況：正常對照組大鼠，在36天死亡一只。模型組第32天死亡一只，各組體重均持續(xù)增加。模型組動物較另外3組瘦弱，皮毛無光澤，倦怠，精神不振，激惹后煩躁易怒。

2.2  對大鼠AST、ALT、TP、ALB的影響（見表1）

多次給予CCL4花生油造成大鼠肝纖維化模型后，可引起大鼠ALT和AST升高，TP和ALB降低。實驗結果顯示，與模型組比較，6周時當飛利肝寧膠囊和復方鱉甲軟肝片組均能不同程度降低大鼠ALT和AST，提高TP和ALB含量（P<0.01，P<0.05），當飛利肝寧組大鼠ALT和AST下降較復方鱉甲軟肝片組明顯，P<0.05；而兩組TP和ALB含量比較，無明顯差異，P>0.05。

 

表1    各組血清AST、ALT、TP、ALB水平比較（ ±S）

組別	n	ALT(U/L)	AST(U/L)	TP(g/l)	ALB(g/l)
正常組(第六周)	5	48.21±10.62	54.72±15.53	79.73±10.14	37.14±7.43
模型組(第六周)	5	458.04±110.35	330.05±98.81	57.01±14.63	27.04±4.91
當飛利肝寧組(第六周)	6	132.43±39.52★△	117.71±49.95★△	65.70±6.62#▲	33.52±3.81#▲
復方鱉甲軟肝片組(第六周)	6	254.54±86.40★	202.80±70.20★	64.40±5.11▲	32.20±4.21▲

注：同模型組相比：★P<0.01，P<0.05；同復方鱉甲軟肝片組比較：#P>0.05，△P<0.05

 

2.3  對大鼠血清HA、LN、PC-III的影響（見表2）

   3周時與正常組、當飛利肝寧膠囊組和復方鱉甲軟肝片組相比，模型組血清HA、PC-III升高，有統(tǒng)計學差異（P<0.01，P<0.05）；LN升高，但統(tǒng)計學上無差異（P>0.05）。6周時同正常組、當飛利肝寧膠囊組和復方鱉甲軟肝片組相比，模型組HA、LN、PC-III升高，有統(tǒng)計學差異（P<0.001,P<0.01,P<0.05）。3周時和6周時當飛利肝寧組和復方鱉甲軟肝片組相比，血清HA、LN、PC-III水平無顯著差異（P>0.05）。

 

表2    各組血清HA、LN、PC-III含量變化的比較（ ±S）

 

組別	n	HA(ng/ml)	LN(ng/ml)	PC-III(ng/ml)
正常組(第三周)	6	167.97±73.65	17.37±5.87	15.23±8.31
模型組(第三周)	6	349.14±82.66	24.45±8.69	32.77±8.33
當飛利肝寧組(第三周)	6	196.83±78.32★▲	20.07±6.12#▲	16.35±7.18★▲
復方鱉甲軟肝片組(第三周)	6	207.68±80.12★▲	22.47±7.52#▲	17.98±7.06★▲
正常組(第六周)	5	204.10±69.24	19.61±60.18	5.62±6.57
模型組(第六周)	5	537.17±195.04	39.95±14.23	36.22±15.09
當飛利肝寧組(第六周)	6	295.12±82.56★▲	21.29±7.10★▲	17.19±7.79★▲
復方鱉甲軟肝片組(第六周)	6	304.35±76.62★▲	27.57±7.89★▲	21.19±8.45★▲

 

注：同復方鱉甲軟肝片組比較：▲P>0.05；同模型組比較：★P<0.01，#P>0.05。

2.4  肝組織病理變化的影響（見表3）

    正常對照組：肝細胞結構正常，未見在脂肪變、腫脹、纖維組織增生等明顯的病理組織學的改變。模型對照組：大部分肝組織間質有不同程度的纖維組織增生，以匯管區(qū)為中心，隨后延伸到小葉區(qū)，小葉結構紊亂，形成大小不等的假小葉，假小葉主要在匯管區(qū)與小葉中央區(qū)之間形成；肝組織間質含有多量脂肪細胞堆積，因大小不等的脂肪顆粒沉積使腫大的肝細胞壓迫肝竇，肝竇變窄，纖維組織中間見有炎癥細胞（主要是淋巴細胞、漿細胞及嗜酸性細胞）浸潤，并有肉芽腫形成；肝細胞和匯管區(qū)的分界不清，同時伴有肝細胞碎片壞死。與模型對照組比較，當飛利肝寧膠囊組和復方鱉甲軟肝片組大鼠肝組織病理損傷程度明顯輕于模型對照組。

 

表3     各組肝纖維化程度及積分的比較

組別	n	S0	S1	S2	S3	S4
正常組(第三周)	6	6	0	0	0	0
模型組(第三周)	6	1	1	2	2	0
當飛利肝寧組(第三周)	6	5	1	0	0	0
復方鱉甲軟肝片組(第三周)	6	4	2	0	0	0
正常組(第六周)	5	5	0	0	0	0
模型組(第六周)	5	0	0	0	2	3
當飛利肝寧組(第六周)	6	3	3	0	0	0
復方鱉甲軟肝片組(第六周)	6	2	3	1	0	0

 

3  討論

    肝臟是機體重要代謝器官，當肝功能損傷時則代謝障礙，并影響其他臟功能，嚴重

者危及生命。肝纖維化是慢性肝病的病理基礎，肝硬變則是各種肝病經久不愈的結局。因而，阻斷肝纖維化的發(fā)生發(fā)展在肝病的治療中有重大意義。祖國醫(yī)學中無肝纖維化一詞，根據(jù)其癥狀多屬于中醫(yī)“脅痛”，“積聚”等范疇，其病因病機為正氣不足“濕熱毒邪”“疫毒”等侵襲機體，留聚肝臟不散，阻滯氣機，氣滯血淤，脈絡壅塞或聚濕成痰或血淤成積，病程長纏綿難愈。宛淑芳等人^[3]認為“濕熱疫毒”是肝纖維化的啟動因素，結締組織增生與變性是淤血的內容之一，因而本實驗根據(jù)中醫(yī)上述認識設立具有清熱解毒，利膽化濕的當飛利肝寧膠囊組和具有扶正化淤的復方鱉甲軟肝片組，干預CCL4所致大鼠肝纖維化形成，其結果表明：3周、6周，當飛利肝寧膠囊組，復方鱉甲軟肝片肝功能指標和血清HA、LN、PC-III值明顯低于模型組，有顯著性差異(P<0.05)，結合3周、6周模型組組織病理變化的情況，肝細胞脂肪變性顆粒變性由輕變重，肝細胞壞死，膠原纖維由少到多，纖維隔離的形成，以及肝小葉結構的逐漸紊亂，說明當飛利肝寧膠囊組，復方癟甲軟肝片均對CCL4所致大鼠肝纖維化有干預作用并延緩了肝纖維化的形成。當飛利肝寧膠囊組的復方鱉甲軟肝片組3周、6周血清HA、LN、PC-III值以及組織病理變化對比均無顯著性差異（P>0.05）說明當飛利肝寧膠囊組在對大鼠肝纖維化的干預方面與復方鱉甲軟肝片組具有同樣的效果，治則用藥不同而有同樣的效果，其原因可能是在肝纖維化形成過程中二者進行了不同層次和方面的干預。但在肝功能的改善方面當飛利肝寧膠囊組優(yōu)于復方鱉甲軟肝片，提示其抗肝纖維化作用是通過抗肝損傷，保護肝細胞、促進肝功能恢復，抑制膠原纖維合成、促進其降解而發(fā)揮的。

 

參考文獻

1   沈吉云，燕忠生，趙淑媛。軟肝合劑對慢性實驗性肝損傷的保護作用及機理。中華實用

中西醫(yī)雜志。1999；12 （20）：1346

2   病毒性肝炎防治方案（試行）（1995年5月北京第五次全國傳染病寄生蟲病學術會議討論

修訂）。中華內科雜志。

3   宛淑方，張俊富。抗纖軟肝沖劑抗肝纖維化的臨床研究。中西醫(yī)結合肝病雜志，1999；9（4）：33